微量法仅需样本几微升,对精子活动率较低的样本,可用上游法提取活精子,活率可达90%以上。本法仅能检测作用于精子尾干的抗体。特异性强,敏感性差,假阴性率较高。
放射性标记免疫球蛋白或A蛋白法:同位素标记的抗人免疫球蛋白或葡萄球菌A蛋白与结合在精子表面的精子抗体结合,用X计数器测定精子表面的放射活性。若以活精子作为抗原其特异性及敏感性较高,且可确定抗体类型。但由于每次实验活动精子来源不同,其结果重复性较差;且设备昂贵,操作者易受放射性损害,故此法报道较少。
间接免疫荧光试验 精子表面结合于抗原后,能与标有荧光素的第二抗体结合,在荧光显微镜下观察呈现荧光的阳性精子比例。因试验中需要甲醇固定致精子膜损伤,内部抗原外露,而抗内部抗原的抗体在正常人中普遍存在,故假阳性太,无临床实用价值。近年来,作液相培养,实验过程中无需固定,又重新确定了本法的使用价值。
精子-透明带结合或穿透试验:自腹腔镜检查中获得的人卵与精子在一定条件下孵育后,观察精子能否穿过透明带进入细胞周围的空间,若精子不能穿过透明带,考虑有制动抗体存在,此试验亦受其它因素干扰。
精子-去透明仓鼠卵穿透试验(SPA):将优化提取的的活精子与无带仓鼠卵混合孵育,在相差显微镜下观察,若卵内含肿胀精子头(带尾)为已经穿透。SPA可用于判定:
①有精浆抗体的精子的受精能力。
②各种抗体在阻止受孕时的重要性。此试验也可受多种因素影响.
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